基础医学院教师宋斌赴日本长崎大学研修报告
发布时间: 2016-12-14 浏览次数: 3

 

本人受日本长崎大学大学院医齿药学综合研究科小路武彦(Takehiko Koji教授邀请,于2015921日至1219日前往其主持的该院组织与细胞生物学系进行访问学习。长崎大学医学部始建于1857年,是全日本第一所传授西方医学的医学院。

免疫组织化学染色法是科研中常用到的重要形态学研究方法。1966年,该系前主任、著名免疫组织化学专家中根一穗(Paul K Nakane)教授等成功引入酶标记抗体,从而开创了免疫酶标组织化学之路。而该系现任主任小路教授则于2008年首创HELMETHisto endo-nuclease-linked detection of methylation sites of DNA)标记法,该法综合了TUNEL和原位杂交、双酶切方法,为一种重要的表观遗传学检测方法,可检测组织DNACCGG位点甲基化水平。

本人在小路教授指导下、结合自身课题研究基础,在日期间的学习和工作主要围绕“5-aza-deoxycytidine(地西他滨,一种特异性DNA甲基化酶抑制剂)对小鼠精子生成影响的表观遗传学研”展开,此外还涉及“2AAF2-乙烯氨基芴)诱导部分肝切除后肝细胞增殖的表观遗传学”和“己烯雌酚对垂体影响的表观遗传学研究”等。

主要学习内容有:(1)学习上述课题相关动物模型的制作;(2进一步规范学习动物取材、石蜡包埋、组织切片,HE染色、PAS染色、细胞增殖抗体和表观遗传相关抗体(如H3K9 acH3K4me3等)的免疫组化染色和TUNEL HELMET的实验检测;(3)超高分辨率荧光显微技术于2014年获颁诺贝尔化学奖。本人还学习了该院新购置的蔡司(ZeissELYRA P.1三维超高分辨率光激活定位显微镜PALM)的使用。该显微镜能够定位细微结构乃至单分子,实现20nm的横向分辨率和50nm的轴向分辨率。(4)参加每周二上午9301030的小组实验结果讨论会和每周四上午8301000的读书报告会;(5)参加周六的博士研究生课程学习并完成相关作业。(6)胶体金标记技术是继同位素、酶和荧光素三大传统标记技术之后对免疫标记技术的又一贡献。本人还有幸参加了由免疫胶体金标记法发明者瑞士苏黎世大学病理学系Jürgen Roth教授主持的英语沙龙。(7)参观了长崎大学附属病院。(8)观摩了于20151167日由长崎大学医学部公共卫生系主办的日本首届One health大会。

主要成果:1进一步规范和掌握免疫组织化学实验的常用技术和方法;如动物取材、石蜡包埋、组织切片,HE染色、PAS染色、细胞增殖抗体和表观遗传相关抗体(如H3K9 acH3K4me3等)的免疫组化染色、TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 检测细胞凋亡、HELMET实验检测DNACCGG位点甲基化水平。(2)熟练掌握实验所需各种显微镜的使用方法,尤其是激光共聚焦显微镜和超高分辨率荧光显微镜的使用。(3)掌握DNA甲基化、组蛋白修饰(磷酸化,乙酰化,甲基化)等相关表观遗传学知识和相关检测方法,并获赠部分表观遗传学研究所需抗体,拟回国后将其运用于课题组关于微波辐射对精子生成影响的机制和治疗方面研究;(4)掌握原创于小路教授实验室的HELMET的实验检测方法,拟应用于后续精子生成调控相关课题研究和申报,并与小路教授初步达成开展相关研究的长期合作意向;(5)学习实验室日常管理工作和科研试剂合理存放和使用,做到科研试剂和耗材使用的最大合理性;学习实验室废水废液和各类实验、生活垃圾的分类和处理方法,最大限度地保护环境;(6)每周学习《cell》、《science》、《nature》三大杂志的最新运用免疫组织化学法和表观遗传学方法进行研究的相关文献,了解关于精子生成调控以及与垂体研究相关的最新研究进展。(6)学会运用各种图像分析、统计学等科研软件进一步深入观察和分析精子生成各时相和步骤变化,在“5-aza-deoxycytidine对小鼠精子生成影响的实验”中取得重要的实验结果,拟在后期课题论文中发表。

 
 
 
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